隨著激光技術(shù)、光譜技術(shù)、顯微技術(shù)以及光纖技術(shù)的飛速發(fā)展,它們在生物科學(xué)的研究與醫(yī)學(xué)診斷中的應(yīng)用與醫(yī)學(xué)診斷中的應(yīng)用越來越深入和廣泛,已成為現(xiàn)代生命科學(xué)中的重要工具,并為之帶來革命性變化。
熒光探劑與激光掃描共焦顯微術(shù)
激光掃描共焦顯微術(shù)的基本原理是,在細(xì)胞內(nèi)一個(gè)任意選定的深度上將激光束聚焦成線度接近單個(gè)分子的極小的斑點(diǎn),并在細(xì)胞內(nèi)一定深度的層面上進(jìn)行掃描,通過光學(xué)系統(tǒng),即可得到細(xì)胞一個(gè)層面的清晰圖象。連續(xù)改變激光的聚焦深度,在一系列的層面上進(jìn)行掃描,最后獲得整個(gè)細(xì)胞的三維圖象。利用目前已達(dá)上千種與細(xì)胞內(nèi)不同分子(或離子)特異性結(jié)合的熒光探針,人們就可以直接觀測活細(xì)胞中各種重要生物分子的位置、運(yùn)動以及與其它分子的相互作用等。例如觀測細(xì)胞骨架上的微管、微絲與中間纖維,觀察信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路上的各種重要的酶與信使分子,還可利用基因重組技術(shù)將自身已有的熒光蛋白引入細(xì)胞,用激光掃描共焦顯微鏡研究基因的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的相互作用與細(xì)胞內(nèi)的“交通”等。熒光探針和熒光蛋白與激光共焦顯微術(shù)的結(jié)合,使人們能夠看到細(xì)胞內(nèi)一個(gè)既復(fù)雜又異彩紛呈的世界。
多光子熒光成像技術(shù)
目前,共焦顯微成像術(shù)使用的是可見光波段的氬離子激光器,因此可能引起活細(xì)胞的損傷。利用多光子,如多光子激發(fā),至少有以下三個(gè)優(yōu)點(diǎn):一是由于近紅外光激發(fā),故對活細(xì)胞的損傷大大減?。欢窃诮M織中由于近紅外光比可見光的透光率高,因此可觀測樣品中更深層的熒光成像;三是許多用在可見區(qū)甚至紫區(qū)的熒光探劑照樣可以使用。這種技術(shù)主要是使用高強(qiáng)度紅外激光,使雙光子的激發(fā)效率與短波長的單光子相當(dāng)?,F(xiàn)在已有一些激光器滿足這一要求。
光鉗和單分子操作
光鉗(Optical tweezer)技術(shù)誕生于20世紀(jì)80年代,發(fā)展于90年代。其基本原理是:當(dāng)一個(gè)微粒(如一個(gè)與生物大分子結(jié)合的硅珠)處于一個(gè)強(qiáng)度按高斯分布的激光光束中時(shí),由于光場強(qiáng)度的空間變化,光束將對微粒產(chǎn)生一種梯度壓力,驅(qū)使其移向光束中心,并使其穩(wěn)定在那里。這樣,激光束就似“鉗子”將粒子牢牢地鉗住,并令其隨光束人為地移動。光鉗施加在微粒上的壓力取決于光的波長、光束的寬度及功率等。當(dāng)激光器的功率為幾毫瓦到幾瓦時(shí),施加于尺寸為微米大小的微粒上的力大約為幾個(gè)到幾百皮(10-10)牛頓。為了不使激光被生物組織強(qiáng)烈吸收,為了不使激光被生物組織強(qiáng)烈吸收,光鉗一般使用近紅外激光器光源。光鉗技術(shù)的重要應(yīng)用是,用以研究和觀測與肌肉收縮、細(xì)胞分裂、蛋白質(zhì)合成等密切相關(guān)的一類蛋白質(zhì)——分子馬達(dá)。研究時(shí),將一個(gè)微米大小的硅珠或聚苯乙烯珠與這些分子馬達(dá)接在一起,在顯微鏡下用光鉗鉗住小珠,啟動分子馬達(dá),就可以測量出分子馬達(dá)運(yùn)動時(shí)產(chǎn)生的力。德國學(xué)者已經(jīng)用激光在卵細(xì)胞膜上打孔,用光鉗將精子抓住并送入卵細(xì)胞,大大提高了體外受精的成功率。今后,新一代的光鉗將具備施力的反饋機(jī)制,使光鉗加在捕捉的離子上的力能改變其大小,從而研究影響分子馬達(dá)的各種因素。光鉗還可以用來對細(xì)胞進(jìn)行各種加工等。因此,光鉗將在細(xì)胞工程技術(shù)方面發(fā)揮重要的作用。